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Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶填料

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  • 发布时间:2012-07-02 00:00
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Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶填料

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  Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶简介:

   全称为:羟丙基葡聚糖凝胶。常用商品凝胶的一种(另一种为交联葡聚糖凝胶Sephadex G)。Sephadex LH-20为Sephadex G-25(葡聚糖凝胶按交联度分类的其中一种商品型号)经羟丙基化处理后得到的产物,此时,葡聚糖凝胶分子中的葡萄糖部分将与羟丙基结合成下列醚键形式:-OH → -OCH2CH2CH2OH

  与Sephadex G比较,Sephadex LH-20分子中-OH基总数虽无改变,但碳原子数所占比例却相对增加了,所以Sephadex LH-20不仅可在水中应用,也可在极性有机溶剂或他们与水组成的混合溶剂中膨润使用。

  1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物

  2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子

  3、载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变。

  Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶主要性能参数:

  分离范围(球蛋白)100-4000

  颗粒大小(μm)20-150

  应用范围胆固醇,脂肪酸,激素,维他命,天然产物

  pH稳定性2-13

  最高流速(cm/h)500

  Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶/乙酸乙酯分离系统的原理及应用

  除了以甲醇、丙酮、二氯甲烷为流动相外,我们还可以使用乙酸乙酯为流动相,以Sephadex LH-20为固定相,对某些混合物进行分离。乙酸乙酯,一种中等极性的疏质子溶剂,在分离某些低分子量有机物时,优于丙酮和二氯甲烷。在对混合物的洗脱顺序上,乙酸乙酯与丙酮、二氯甲烷相同,但其所使用的固定相Sephadex LH-20的柱床体积较小,分离速度更快。除此之外,Sephadex LH-20在乙酸乙酯中的膨胀程度小于在丙酮中的膨胀程度,因此,导致了膨胀后的Sephadex LH-20凝胶孔体积变小,孔径变窄,从而使其更易吸附低分子量的中等极性有机化合物,分离效果更好。乙酸乙酯对混合物进行分离的原理,主要是基于待分离物质间的极性和氢键的差异。

  Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶分离的技巧:

   (1)分离时流速不可太快,切切不可心急,所谓欲速则不达;接馏分时可开全速,节省时间。

  (2)柱子尽可能长,Sephadex LH20柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。

  (3)馏分一定要接的细,可1/10,或1/20个保留体积接成一馏分。

  (4)洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。

  (5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20分鞣质

  (6)Sephadex LH20对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。

  (7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗,最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时,可在以上处理基础上,减压抽干,再用少量乙醚洗净抽干,室温充分挥散至无醚味后,60~80°C干燥后保存。

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