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TSKgel色谱柱检测蛋白质上应用

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  • 发布时间:2012-06-19 00:00
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TSKgel色谱柱检测蛋白质上应用

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  关于蛋白的HPLC方法的分析检测,TSKgel色谱柱产品及应用中最熟悉的莫过于SW/SWXL系列的产品了。

  蛋白制品的生产过程中,尤其是基因重组蛋白制品/药物,由于上、下游工艺的不同,以及工艺过程中的酶解作用、表达缺陷、氧化、变性、聚合、糖基化、磷酸化/脱磷酸化、脂质化、甲基化、酰胺化等各种因素的发生,从而导致过程产品或最终产品中除目标蛋白外,会存在微量的氨基酸序列异构体、多聚体、蛋白片段、带电或空间异构体、糖基化程度不同等的多种杂质。

  过去,我们很熟悉使用SEC(分子尺寸排阻色谱)进行蛋白多聚体、蛋白片段的HPLC分析方法。然而,为了更好地了解和控制产品的质量,并由品质管理结果指导工艺生产和

  工艺改进,现行的、可用于蛋白(如单克隆抗体产品)检测的HPLC分析方法已经有很多选择了。反过来讲,仅仅使用SEC-HPLC分析方法显然是不够的。对于蛋白(当然也包括多肽)产品的过程质量控制,或者最终产品的品质控制,目前HPLC分析方法的目的及其应用主要归纳如下。

  

  1、多聚体及蛋白片段的分析

  多聚体容易引起过敏反应。蛋白间的相互作用、相对苛刻的层析纯化条件(如较低的酸性pH条件下)等原因会引起蛋白的聚集反应。另一方面,蛋白酶的存在等会导致蛋白的降解从而会造成低分子蛋白片段的存在。常见的也是相对比较方便、直观的HPLC分析方法为SEC(分子尺寸排阻色谱)-HPLC方法。主峰(一般为蛋白的单体;Monomer)前的为二聚体和多聚体,主峰后的是分子量(分子空间尺寸)较小的蛋白片段。我公司的TSKgel G2000SWXL常用于小蛋白、多肽的多聚体和片段检测;TSKgel G3000SWXL常用于大蛋白的多聚体和片段检测。如果追求分辨率,还可以考虑使用粒径更小的填料装填的色谱分析柱(如TSKgelSuperSW2000, SuperSW3000色谱柱)。

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