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Sephadex LH-20

HC-75 阳离子交换色谱柱
HC-75阳离子交换色谱柱用于阳离子配位交换分离糖类。填料为磺酸化的苯乙烯-聚乙烯苯,粒径9μm ,柱子内径有4.1、7.8和10.0mm三种规格。316不锈钢柱体。有钙型(Ca),氢型(H)和铅型(Lead)三种。
➣水做流动相
➣UV和RI检测
➣氢型色谱柱符合美国药典USP L17,钙型色谱柱符合美国药典USP L19,铅型色谱柱符合美国药典USP L34。
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产品编号
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美国GE填料
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产品描述
参数

Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶主要性能参数:

分离范围 (球蛋白) 100-4000

颗粒大小 ( μm ) 20-150

应用范围 胆固醇,脂肪酸,激素,维他命,天然产物

pH稳定性 2-13

最高流速 (cm/h ) 500

Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶/乙酸乙酯分离系统的原理及应用

除了以甲醇、丙酮、二氯甲烷为流动相外,我们还可以使用乙酸乙酯为流动相,以Sephadex LH-20为固定相,对某些混合物进行分离。乙酸乙酯,一种中等极性的疏质子溶剂,在分离某些低分子量有机物时,优于丙酮和二氯甲烷。在对混合物的洗脱顺序上,乙酸乙酯与丙酮、二氯甲烷相同,但其所使用的固定相Sephadex LH-20的柱床体积较小,分离速度更快。除此之外,Sephadex LH-20在乙酸乙酯中的膨胀程度小于在丙酮中的膨胀程度,因此,导致了膨胀后的Sephadex LH-20凝胶孔体积变小,孔径变窄,从而使其更易吸附低分子量的中等极性有机化合物,分离效果更好。乙酸乙酯对混合物进行分离的原理,主要是基于待分离物质间的极性和氢键的差异。

Sephadex LH-20/葡聚糖凝胶分离的技巧:

(1)分离时流速不可太快,切切不可心急,所谓欲速则不达;接馏分时可开全速,节省时间。

(2)柱子尽可能长,Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。

(3)馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。

(4)洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。

(5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质

(6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。

(7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗,最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时,可在以上处理基础上,减压抽干,再用少量乙醚洗净抽干,室温充分挥散至无醚味后,60~80℃干燥后保存。

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