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TSKgel Super 系列反相色谱柱

TSKgel Super-ODS、Super-Octyl 和 Super-Phenyl 色谱柱均由2.3 µm球形硅胶颗粒制备而成,孔径为14 nm。色谱柱的硅颗粒大小非常均匀,能提供超过每米160,000 塔板的柱效率,但其压降可与3 µm颗粒填充柱相媲美。除谱带增宽作用降低而产生的灵敏度提高以外,Super系列的主要优势还在于节省时间和溶剂的消耗量。 注意:Super系列色谱柱的硅颗粒具有相对较小的空隙容积,因此会产生比其它大多数反相柱更短的保留时间。例如,为实现与TSKgel ODS-100V 相似的保留时间,TSKgel Super-ODS 色谱柱的流动相有机溶剂百分比必须减少20~30% 左右。 TSKgel Super-Octyl 和TSKgel Super-Phenyl 色谱柱适用于亲水和疏水肽、胰蛋白酶降解物、肽图分析、低分子量药物、咖啡碱、嘧啶、核苷和核苷酸的高通量分析。

蛋白分析用反相色谱柱

反相色谱法(RPC)是最常用的色谱分离模式之一,是研究分析小分子量化合物的首选技术手段。近年来,反相色谱法也成为了分离多肽、蛋白质及其它生物分子的公认方法。 TSKgel Protein C4-300 是东曹生命科学最新推出的一款反相色谱柱。它是专门针对重组蛋白、抗体片段或PEG蛋白等蛋白质样品的高分辨率分析而设计。TSKgel Protein C4-300 色谱柱的孔径为30 nm,是分离蛋白质的理想选择。 TSKgel TMS-250 色谱柱是RPC法分析分子量较大蛋白质的理想选择。包含一个独特的C1键合相,填料是通过将三甲基硅烷基单体结合到孔径为25 nm的球形硅胶上制备而成。由于配体的疏水性较低,即使分析分子量较大的蛋白样品仍然可以得到优异的回收率。相对于大孔径的C18柱,醛缩酶(158kDa)等蛋白质可显示出尖锐的峰形。

高通量分析反相色谱柱

TSKgel ODS-140HTP 色谱柱是采用高压方式将粒径2.3 µm的填料装填于其中,是一款可以进行高通量分析(高速/高分离效果)的反相色谱柱。 与常规的3 µm或5 µm粒径的ODS色谱柱相比,可以进行高速、高分离效果的分析测定。与粒径小于2 µm的超高压色谱柱相比,其又可以使用在普通的HPLC系统上而获得高通量的分析测定。

聚合物基质反相色谱柱

聚甲基丙烯酸基质的反相色谱柱有较宽的孔径和粒径范围可供选择。尽管在分辨率和稳定性方面不如硅胶基质的反相色谱柱,但是聚合物基质的色谱柱具有以下优势: 更宽的pH使用范围(1-12),可使许多碱性化合物在非带电形式下得到分析,从而减少二次相互作用发生,进而改善样品峰形。 由于二次相互作用的降低,大大改善了多肽和蛋白的回收率。

高通量分析反相色谱柱

反相是应用最广的HPLC保留方式,但极性很大的化合物常常不能充分保留在低百分比有机相中,甚至不能保留在100%含水流动相中。对于含有相同组分的样品,正相洗脱顺序与RPC中的洗脱顺序正好相反。尽管正相LC在传统上采用非极性有机流动相和硅固定相,但如今,多数正相分离法均采用含水有机流动相和极性较强的键合固定相。该HPLC方式目前普遍称为HILIC,即亲水作用色谱法。 如果采用强极性键合相(如TSKgel Amide-80),正相或亲水作用色谱法(HILIC;见参考资料)可改善极性化合物的保留行为,其保留机理是使用乙腈与乙酸铵缓冲液的混合流动相。与反相保留行为相反,在HILIC中,通过增加乙腈百分比可更长时间地保留样品中的极性成分。

阳离子交换色谱柱

阳离子交换色谱法采用含有硫离子的强阳离子或含有羧甲基(CM)官能团的弱阳离子交换剂。抗衡离子(常为 Na+)维持电中性。 在离子交换色谱法中,流动相缓冲剂的 pH 值必须在电荷分子 pI 值或 pKa 值与固定相上电荷基团的 pKa 值之间。例如,在阳离子交换色谱法中, pI 值为 8.2 的分子在 pH 6.0 的流动相缓冲剂中溶解,同时固定相 pKa 值为 1.2。

阴离子交换色谱柱

阴离子交换色谱法采用含有季铵离子的强阴离子或采用具有叔胺或仲胺官能团(如DEAE,即二乙氨乙基)的弱阴离子交换剂。抗衡离子(常为 Cl- )维持电中性。 在离子交换色谱法中,流动相缓冲剂的pH 值必须在电荷分子 pI 值或 pKa 值与固定相上电荷基团 pKa 值之间。例如,在阴离子交换色谱法中, pI 值为 6.8 的分子在 pH 值为 8.0 的流动相缓冲液中解离,同时固定相 pKa 为 10.3。

疏水作用色谱柱

在疏水作用色谱法(HIC)中,弱非极性固定相与高浓度的盐的水溶液同时使用。该方法主要通过减少盐的浓度来分离蛋白。 在反相色谱中,蛋白通过与填料上烷基或芳基相互作用保留下来。 不同于反相色谱,在疏水反应色谱中上述官能团的密度较低,且蛋白分子只在一个或少数几个位置上吸附。 盐浓度较高时会产生吸附作用,但若加入低百分比浓度的有机溶剂降低盐浓度,则会产生脱附作用。 尽管二者均以疏水作用为基础,但HIC分离的选择性明显不同于反相LC。 相对于RPC,HIC的最高容量较低,但其优势在于:流动相条件(主要是含水流动相)通常不会破坏高阶蛋白质结构。

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