全国统一服务咨询电话: 400-600-6161

2
3
4
5
6
7
8

行业动态

全部分类

在线客服

这是描述信息

质粒DNA色谱分析、分离的推荐选择!

  • 分类:行业动态
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2020-06-24 00:00
  • 访问量:

质粒DNA色谱分析、分离的推荐选择!

详情

  质粒DNA色谱分析、分离的推荐选择!

  使用TSKgel和TOYOPEARL®助力质粒载体关联治疗药物的研发

  尽管在新品快讯(TSKgel®、TOYOPEARL®)No. 15中,介绍了在分析、分离纯化病毒载体时使用了分析用TSKgel色谱柱以及制备用填料TOYOPEARL的论文和技术资料,但也收到了很多在分析、分离纯化质粒DNA时的应用实例报告。目前整理的论文和技术资料如下。 

  ● 分析、分离质粒载体时使用的层析分离模式

分离模式

分离方法

分离机理

去除杂质

纯化步骤

备注

尺寸排阻色谱(SEC)

等度分离

分子尺寸的差异
(质粒分子较大,在排阻V0附近洗脱)

延迟洗脱

初期粗纯
精制

样品加载量少,
难以规模放大

阴离子交换色谱(AIEC)

吸附/梯度洗脱

电荷的差异
(质粒带高负电荷)

流穿或梯度
(质粒异构体分离)

捕获
中间步骤
精制

可以分离质粒异构体,
但条件优化有些复杂

疏水色谱(HIC)

流穿
吸附/梯度洗脱

疏水性的差异

疏水性的差异
(质粒异构体分离)

捕获
中间步骤

与AIEC相比,
吸附载量较低

  Ref.: S. Palmieri et al., BioProcess International, 2011, Lonza webinar, modified

  ● 使用TSKgel和TOYOPEARL分析、分离质粒载体的实例(文献、技术资料)

分离模式

色谱柱

目标、关键词

论文标题

2008

SEC, IEC, HIC

TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL, DNA-NPR®, Butyl-NPR

质粒DNA

Characterization of Plasmid DNA Samples by Chromatographic Methods

2007

IEC

TSKgel DNA-NPR

质粒DNA

Separation of topological forms of plasmid DNA by anion-exchange HPLC: Shifts in elution order of linear DNA

2005

SEC

TSKgel G-DNA-PW, G6000PWXL

质粒DNA

High-speed chromatographic purification of plasmid DNA with a customized biporous hydrophobic adsorbent

2004

IEC

TSKgel DNA-NPR

质粒DNA

Effective and robust plasmid topology analysis and the subsequent characterization of the plasmid isoforms thereby observed

2019

AFC

精氨酸固定化
AF-Epoxy-650M

超螺旋质粒DNA

Effect of Chromatographic Conditions on Supercoiled Plasmid DNA Stability and Bioactivity

2005

HIC

Butyl-650M

质粒DNA

Improved downstream process for the production of plasmid DNA for gene therapy

  使用TSKgel阴离子交换色谱柱(AIEC)分离质粒载体的实例

绿百草科技

  色谱柱:TSKgel DNA-NPR (2.5 µm, 4.6 mm ID × 7.5 cm)

  洗脱液: 缓冲溶液A:20 mmol/L Tris-HCl (pH 9.0)

  缓冲溶液B:含有1 mol/L NaCl的缓冲溶液A

  缓冲溶液B:从50%到65%的10 CV的线性梯度

  流速:1 mL/min

  检测:UV (260 nm)

  样品:PUC19 质粒

  在纯化质粒DNA(载体)时,除了需要去除混入的宿主的基因组DNA和RNA、蛋白质等杂质以外,还需要去除质粒DNA的立体异构体Open circular(oc-)体、Linear体。只纯化Supercoiled(closed circular: cc-)体。

  ● 质粒载体的纯化步骤示例

绿百草科技

  下述层析步骤组合适用于质粒DNA的纯化工艺。

  · SECà混合模式层析(Thiophilic Interaction Chromatography)àAIEC(A公司)

  · HICàAIECàSEC(B公司)

  · AIECàHIC(C公司)

  · HIC(流穿:FT)àHIC(D公司)

  · 其他:固定化金属螯合亲和层析(IMAC)

  羟基磷灰石层析

友情链接:生物谷   环球经贸网   教育装备   丁香园   仪器仪表交易网   医疗商务网   中国化工仪器网
生化分析仪器网   仪器展览网   中国色谱网   生技网   仪器信息网   仪器仪表网

绿百草

北京绿百草科技发展有限公司 页面版权所有 | 编号: 京ICP备05010649号  网站地图
地址:北京市昌平区景兴街18号院企业墅上区4-3号楼
电话:
400-600-6161  传真:010-88579127 Email: info@greenherbs.com.cn

网站建设:中企动力  北京